产品简介

MEALLCELL NK免疫细胞无血清培养基是米奥生物自主研发的一款无外源动物成分的免疫细胞培养基。用于NK免疫细胞的活化和培养。本产品内毒素水平远低于中国药典标准，生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。
Meallcell NK免疫细胞培养基主要成分：氨基酸，维生素、无机盐、白蛋白，转铁蛋白、胰岛素、微量元素，细胞因子等。 

产品特性

1.无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。

2.全程无血清生产，极大降低批次间差异。

3.可用于原代分离，且培养过程无需包被培养板。

4.扩增效率高，24h左右增殖翻倍，节省培养时间。

5.内毒素< 0.03EU/ml，远低于中国药典水平。

产品内容

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操作方法（以下步骤皆应在无菌条件下操作）

1.所需主要试剂耗材：
1）淋巴细胞分离液
2）注射用生理盐水
3）T75培养瓶
4）T225培养瓶
5）640cm2培养袋
2.实验流程：
1）用抗凝管取外周血50mL，上下颠倒混匀，防止血液凝固
2）将抗凝血送进细胞房，转移到2支50mL离心管中，25mL/支，800g离心10min。
注意：一定要关闭离心机刹车，将离心机降速调整为0
3）轻轻吸取上层血浆至50mL离心管中，取200uL进行病毒五项检测（甲肝、乙肝、丙肝、艾滋、梅毒），剩余血浆（约20~25mL）放入56℃水浴锅，进行灭活30min。
4）取其中一支剩余血细胞（约15mL左右），用生理盐水重悬，终体积为40mL
5）取50mL离心管2支，分别加入15mL淋巴细胞分离液
6）将40mL血液分2份，20mL/份，分别轻轻加到15mL淋巴细胞分离液的表面，注意动作一定要轻柔，不要让血液与淋巴细胞分离液相混，以免影响PBMC的分离效果
7）400g离心30min
注意：一定要关闭离心机刹车，将离心机降速调整为0
8）离心结束后，可以看到明显的分层。将最上层清亮的生理盐水层吸除一半左右
9）用巴氏吸管轻轻吸出白膜层的PBMC，注意：尽量少吸取分离液，也不要吸到最下层的红细胞层，以免影响分离效果
10）用2倍体积的生理盐水充分稀释收集的PBMC悬液
11）800g离心10min后，用生理盐水重悬，计数，每个CTL试剂盒，需要的起始细胞量大概为2~3×10^7，将多余的PBMC细胞冻存，冻存规格：3×10^7/支（1mL）。
800g离心5min后，获得PBMC，然后按照下列表格对细胞进行操作。
3.细胞收集
a)待细胞计数达100亿左右，进行离心收集细胞，每次1200rpm离心10min。
b)将收集到的细胞进行冻存，并取样送检
c)冻存标准为：2亿细胞/mL冻存液
待收到送检结果，确认细胞合格之后，按照正常的流程进行复苏和制备。

质量控制